مقالات

آنالیز آفلاتوکسین توسط HPLC 1260 Agilent سیستم دو حلاله با ستون ZORBAX RRHT 1.8 μm بوسیله دتکتور فلورسانس بعد از فرآیند مشتق سازی الکتروشیمیایی

آنالیز آفلاتوکسین توسط HPLC 1260 Agilent

تعیین آلوده کننده ها در مواد غذایی نیاز به دستگاه کروماتوگرافی مایع با بازدهی بالا و حساسیت زیاد دارد.
با استفاده از سیستم Agilent 1290 Infinity LC و سیستم های دو حلاله LC Agilent 1260 ، امکان انتقال متد به منظور تسریع روند آنالیز وجود دارد.
تعیین آفلاتوکسین های B1 ، B2 ، G1 و G2 توسط HPLC و مشتق ساز post-column و استفاده از دتکتور فلورسانس همراه با ستون های کوتاه تر Agilent ZORBAX RRHT 1.8 میکرومتر به جای ستون های معمولی 5 میکرومتر میتوان استفاده کرد که موجب تسریع فرآیند آنالیز به همراه رزولوشن بالا باشد.

مقدمه

آفلاتوکسین ها به طور طبیعی مایکوتوکسین هایی هستند که توسط قارچ های مولد تولید می شوند که در طول تولید و ذخیره سازی روی برخی محصولات غذایی رشد می کنند.

آفلاتوکسین B1 (شکل 5) خطرناک ترین است ، زیرا سرطان زا است و مقادیر بسیار اندک می تواند برای انسان سمی باشد.

به همین دلیل ، مواد غذایی باید کنترل شوند ، زیرا آلودگی توسط کپک های مختلف تولید آفلاتوکسین ها به راحتی می تواند رخ دهد.

4 گونه اصلی آفلاتوکسین B1 ، B2 ، G1 و G2 میباشد و همچنین آفلاتوکسین های M1 & M2 که در شیرهای دام وجود دارد

آفلاتوکسین B1 ، B2 ، G1 و G2 میزان جذب توسط دتکتور UV را نشان می دهد ، اما حد تشخیص و حساسیت خوبی ندارد و دتکتور UV و یا VWD مناسب آنالیز آفلاتوکسین ها نمیباشد.

برای بهبود حد تشخیص Detection Limit ، آفلاتوکسین ها را می توان با post-column و یک سلول نگهدارنده Corning Cell مشتق کرد.

پس از bromation الکتروشیمیایی post-column مایکوتوکسین ها ، می توان حساسیت را با استفاده از دتکتور فلورسانس به طرز چشمگیری افزایش داد.

با این تکنیک تأثیر اجزای ماتریس نیز کاهش یافته و به حداقل می رسد

فرآیند مشتق سازی post-column نیازمند 4 ثانیه واکنش بین Coring Cell و دتکتور میباشد

Experimental
Analysis of aflatoxins can be achieved by using a fast LC configuration
Experimental conditions
Eluent: Wasser/Acetonitrile/Methanol /65% Nitric Acid / KBr: 600 / 200 / 200 / 100 μL/ 119 mg/L
pH = 2.79
Detection: FLD (Ex: 362 nm; Em: 435 nm)
Flow: 1.0 mL/min
Injection volume: 20 μL

Temp: 40 °C

آنالیز آفلاتوکسین با استفاده از دتکتور فلورسانس توسط دستگاه HPLC در شکل های فوق نمایان است

آنالیز آفلاتوکسین توسط این روش در کمتر از 8 دقیقه انجام شده است
میزان آفلاتوکسین بصورت انتخابی بر روی نمونه غذایی فندق و نوعی شیرینی انجام شده است

چه غذاهایی حاوی آفلاتوکسین هستند؟

آفلاتوکسین ها در اثر آلودگی قارچی قبل و بعد از برداشت می توانند در محصولات غذایی , میوه و اجیل مانند  مانند مغزهای بادام زمینی ، گردو , پسته و انواع مختلف آجیل ، ذرت ، برنج ، انجیر و سایر غذاهای خشک ، ادویه ها ، روغن های گیاهی خام و دانه های کاکائو وجود داشته باشند.

چندین نوع آفلاتوکسین به طور طبیعی تولید می شود.

آیا آفلاتوکسین برای انسان مضر است؟

دوزهای زیاد آفلاتوکسین منجر به مسمومیت حاد (آفلاتوکسیکوز) می شود که می تواند تهدید کننده زندگی باشد ، معمولاً از طریق آسیب به کبد. شیوع نارسایی حاد کبدی (زردی ، بی حالی ، حالت تهوع ، مرگ) که به عنوان آفلاتوکسیکوز شناخته می شود ، از دهه 1960 در جمعیت های انسانی مشاهده شده است.

چگونه میتوان آفلاتوکسین را کنترل کرد؟

اقدامات مدیریت میدانی که باعث افزایش بازده می شوند ، می توانند خطر ایجاد آفلاتوکسین را کاهش دهند.

شامل استفاده از Resistance Variety  ( انواع مقاوم گیاهانی هستند که در گروه خاصی قرار دارند و در برابر حمله آفات یا بیماری های گیاهی آسیب پذیر نیستند ) ، تناوب زراعی ، کاشت به موقع ، کنترل علف های هرز ، کنترل آفات به ویژه کنترل آفات حشرات و جلوگیری از خشکسالی و تنش غذایی از طریق کوددهی و آبیاری هستند.

چگونه میتوان میزان آفلاتوکسین را تشخیص داد؟

روشهای مختلفی از جمله کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) ، کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا (HPLC) ، طیف سنجی جرمی ، روش جذب جاذب ایمنی مرتبط با آنزیم (ELISA) و حسگر ایمنی الکتروشیمیایی ، برای تشخیص و تعیین مقدار آفلاتوکسین در خوراکی ها کاربرد دارد.

ولی بهترین  روش اول استفاده از دستگاه LCMS  میباشد و سپس استفاده از دستگاه کروماتوگرافی مایع HPLC با دتکتور فلورسانس و استفاده از مشتق ساز میباشد

امروزه روشهای الایزا مورد تایید سازمانهای غذا و دارو و اداره استاندارد نیست.

آیا شیر آفلاتوکسین دارد؟

شیر از جمله منابع مهم آفلاتوکسین در زنجیره غذایی انسان است. در حالی که هر دو آفلاتوکسین M1 و B1 می توانند در شیر وجود داشته باشند ، ماده اول ده برابر بیشتر است.

آزمایش آفلاتوکسین چیست؟

آفلاتوکسین ها مواد طبیعی تولید شده توسط کپک ها و قارچ ها هستند که حتی در غلظت کم نیز اثرات سمی بر روی انسان و حیوانات نشان می دهند

آفلاتوکسین m1 در شیر چیست؟

آفلاتوکسین M1 (AFM1) متابولیت هیدروکسیله آفلاتوکسین B1 (AFB1) است و می تواند در شیر یا فرآورده های شیری حاصل از دامهایی که خوراک آلوده مصرف کرده اند یافت شود (آردیک و همکاران ، 2009). … بنابراین ، وجود AFM1 در شیر نگران کننده است

چگونه مایكوتوكسین ها را پیدا كنم؟

مایكوتوكسینها معمولاً با استفاده از روشهای كروماتوگرافی ، سنجشهای مبتنی بر آنتی بادی و روشهای مبتنی بر DNA برای قارچهای خاص مایكوتوکسیژنیك در مواد غذایی شناسایی و كمیت می شوند.

تعدادی کیت تجاری ELISA برای آفلاتوکسین ها ، دئوکسی سینوالنول ، زیرالنون ، اوکراتوکسین ها و فومونیزین ها موجود است.