ارزیابی عملکرد دستگاه کروماتوگرافی مایع HPLC ، UHPLC و UPLC با استفاده از متد فاز معکوس برای پپتیدها
ارزیابی عملکرد دستگاه کروماتوگرافی مایع HPLC ، UHPLC و UPLC با استفاده از متد فاز معکوس برای پپتیدها
دستگاه های مدرن کروماتوگرافی مایع LC که دارای تفرق کمتری در سیستم هستند ، توانایی عملکرد بهبود یافته در آنالیز مولکول های زیستی یا بیو مولکول ها را فراهم می کنند.
هدف
برای ارزیابی عملکرد نسبی از نظر رزولوشن و کیفیت پیک در پلتفرم های مختلف کروماتوگراف مایع (HPLC ، UHPLC و UPLC) با استفاده از مت فاز معکوس reversed-phase برای پپتیدها.
زمینه
بسیاری از تکنیک های مورد استفاده و رایج برای انالیز ترکیبات داروها در آزمایشگاههای کنترل کیفیت QC مبتنی بر تکنیک HPLC هستند ، اما مزایای قابل توجه در مدرن سازی روش های انالیزی کروماتوگرافی مایع وجود دارد.
از آنجا که داروهای زیستی ذاتاً پیچیده تر از مولکول های کوچک هستند ، تجزیه و تحلیل آنها نیاز به تفکیک سطوح بیشتر رزولوشن و تنوع مولکولی دارد.
صنعت و نهادهای نظارتی در تلاش برای ارتقا product کیفیت کلی محصول ، بهبود مستمر فرآیند و استفاده از ابزار جدید را تشخیص داده و از آن پشتیبانی می کنند.
با به روزرسانی سیستم های HPLC برای lower dispersion پلتفذم های کروماتوگرافی مایع LC ، می توان روش های قدیمی را به روز کرد تا از قابلیت های عملکرد بیشتر و همچنین فن آوری های مدرن ستون استفاده شود.
در این مطالعه ، 3 پلتفرم های مختلف کروماتوگراف مایع (HPLC ، UHPLC و UPLC) از نوع 4حلاله Quaternary با تفاوت های شناخته شده در سیستم dispersion با استفاده از یک متد گرادیانت فاز معکوس reversed-phase ارزیابی می شود.
اگرچه روشهای ایزوکراتیک isocratic تفاوت چشمگیرتری در بهبود عملکرد با سیستمهای پراکندگی کمتر نشان می دهند ، اما روشهای گرادیانت بیشتر در تجزیه و تحلیل بیوتراپیوتیک ها biotherapeutics استفاده می شوند.
به همین دلیل ، از استانداردهای پپتیدی به عنوان یک مدل آنالیت برای نشان دادن پیشرفت عملکرد در 3 پلتفرم های مختلف کروماتوگراف مایع (HPLC ، UHPLC و UPLC) هنگام انتقال به سیستم های lower dispersion استفاده می شود.
از نرم افزار کروماتوگرافی مایع کمپانی واترز Empower 3 برای یکپارچه سازی کروماتوگرام ها و گزارش پیک کروماتوگرام و رزولوشن مطابق با دستورالعمل های USP استفاده شده است که می تواند در روش پردازش مشخص شود.
HPLC Vs UHPLC Vs UPLC
راه حل
در این روش سعی داریم 3 مدل کروماتوگرافی مایع را مورد مقایسه و بررسی قرار دهیم
- دستگاه کروماتوگرافی مایع HPLC (Alliance)
- دستگاه کروماتوگرافی مایع الترا bio-compatible UHPLC (Arc Bio System)
- دستگاه کروماتوگرافی مایع UPLC bio-compatible (H-Class Bio System)
H- Class Bio System کمترین سیستم پراکندگی را داراست.
با اندازه گیری عرض پیک (واحد دقیقه) و ضرب در سرعت جریان ، 3/0 میلی لیتر در دقیقه ، گسترش باند اضافی ستون را می توان محاسبه کرد و در جدول 1 گزارش شده است.
| LC category | System | Configuration | Extra column band |
| HPLC | Alliance | 30 cm CH UV/Vis detector | 50 |
| UHPLC | Arc Bio (P1, P2) | CH-A UV/Vis detector | 23 |
| UPLC | H-Class Bio | CH-A TUV detector | 7 |
هنگام انتقال از دستگاه کروماتوگرافی مایع با پراکندگی بالاتر به پایین ، پیشرفت قابل ملاحظه ای مشاهده می شود (Alliance> Arc Bio System> H-Class Bio System).
برای کشف چگونگی تأثیر یک سیستم پراکندگی dispersion پایین بر عملکرد یک روش آنالیزی ، از یک متد گرادیانت فاز معکوس برای پپتیدها برای ارزیابی رزولوشن و پیک قله در سیستم کروماتوگرافی مایع استفاده شد.
به منظور مقایسه یکسان هر 3 مدل کروماتوگرافی مایع از یک ستون Waters ™ XBridge ™ BEH ™ C18 (130 Å ، 2.5 میکرومتر ، 4.6 100 100 میلی متر) بر روی هر یک از سه سیستم اجرا شد ، و شرایط متد یکسان می باشد.
نتایج کروماتوگرافی در شکل 2 مشاهده می شود.
ACQUITY Arc Bio System و H-Class Bio System پیک های شارپ تری را تولید می کنند که منجر به ظرفیت پیک بالاتر و رزولوشن بهتر می شود.
ظرفیت و وضوح پیک برای هر سه سیستم در جدول 2 گزارش شده است.
وضوح تصویر بین قله های پنج و شش از 1.7 بهبود یافته است
| System | Resolution (Peaks 5 and 6) | Peak Capacity, 4 (Average) |
| Alliance | 1.7 | 118 |
| Arc Bio | 2.7 | 170 |
| H-Class Bio | 3.1 | 196 |
خلاصه
عملکرد سیستم های تفرق dispersion LC , رزولوشن و ظرفیت پیک در دستگاه های HPLC ، UHPLC و UPLC مقایسه شد.
گسترش باند ستون column band broadening برای هر سیستم محاسبه شد و همانطور که انتظار می رفت ، برای سیستم عامل های UHPLC (Arc Bio System) و UPLC (H-Class Bio System) در مقایسه با سیستم HPLC (Alliance) به طور قابل توجهی کمتر بود.
اثرات سیستم های پراکندگی پایین تر با استفاده از نشان داده شد
یک روش شیب فاز معکوس برای پپتیدها برای نشان دادن وضوح بهبود یافته و ظرفیت اوج در سه سیستم عامل LC.
از سنجش های معمول تا توسعه روش آنالیت های پیچیده ، تفاوت عملکرد بین سیستم عامل های سازگار ، یک راه حل مناسب برای هدف در تجزیه و تحلیل مولکول های زیستی را ارائه می دهد.
زیست درمانی Biotherapeutics چیست؟
بیوتراپیک ها یا بیولوژیک ها محصولات دارویی هستند که ماده فعال از یک منبع بیولوژیکی استخراج یا تولید می شود
پراکندگی dispersion در کروماتوگرافی چیست؟
پراکندگی dispersion دشمن وضوح بالا است.
همچنین از آن به عنوان گسترش باند یا عریض شدن پیک یاد می شود.
پراکندگی dispersion یک پارامتر ترکیبی است که از سهمات حالت های جریان ، حالت های انتقال جرم ، ویسکوزیته فاز متحرک ، اندازه املاح و friction ترکیب شده است
تفاوت UPLC و Uhplc چیست؟
UPLC نسبت به UHPLC رزولوشن بالاتر و پیک های شارپ تر ایجاد می کند. برای ترکیب فشار بالا ، درجه حرارت بالا و افزایش PH فاز متحرک بر روی ستونها و ابزارهای UPLC.
کلیدواژه : ارزیابی عملکرد دستگاه کروماتوگرافی مایع HPLC ، UHPLC و UPLC با استفاده از متد فاز معکوس برای پپتیدها , پپتیدها , انالیز پپتیدها ,ستون واترز waters , قطعات واترز waters , ملحقات واترز waters , لامپ دوتریوم واترز waters , فلوسل واترز waters ,
دیدگاهتان را بنویسید