اندازه گیری و تعیین Total Protein توسط دستگاه اسپکتروفتومتر Lambda UV-VIS PerkinElmer

تعیین Total Protein توسط دستگاه اسپکتروفتومتر

روش های کمی  Quantification برای تعیین  پروتئین کل از طولانی ترین آزمایش های اساسی و مهم علوم زیست شناسی است.

اسپکتروفتومتری UV / Vis به طور گسترده ای برای تعیین پروتئین استفاده می شود.

این مقاله کاربردی  یک روش معمول پروتئین ، روش بردفورد را توصیف می کند. داده ها به سرعت با استفاده از دستگاه طیف سنج اسپکتروفتومتر  UV / Vis LAMBDA ™ 465 بدست می آیند و با استفاده از نرم افزار UV Lab processed پردازش می شوند.

قاعده کلی

رنگ Coomassie Brilliant Blue با محتوای پروتئین یک نمونه در یک محلول اسیدی ایجاد  پیوند می کند. در نتیجه ، حداکثر  میزان جذب رنگ از 465 نانومتر به 595 نانومتر تغییر می کند.

جذب در 595 نانومتر متناسب  با غلظت پروتئین است.

در این روش ، Color Reaction خیلی سریع تکمیل می شود   (در مدت 2 دقیقه) و به مدت 1 ساعت پایدار است.

مزایای روش بردفورد نسبت به روش Lowry :

روش بردفورد نسبت  به روش Lowry حساسیت  بیشتری دارد

روش بردفورد  می تواند میزان  1 ~ 20 میکروگرم پروتئین را با استفاده از microassay   اندازه گیری کند.

روش بردفورد نسبت  به روش Lowry  سریعتر است و به ندرت تحت تأثیر اجزای غیر پروتئینی قرار می گیرد.

معرف ها و دستگاه ها :

1. معرف رنگ Bradford

یک محلول مخلوط از رنگ Coomassie Brilliant Blue G-250 ،

اسید فسفریک و متانول 5 بار رقیق می شود

آب مقطر و فیلتر شده

2. استاندارد پروتئین – گاما گلوبولین گاو (یا سرم گاو) – Bovine gamma globulin (or Bovine serum albumin-BSA

آلبومین-BSA) 0.1 میلی گرم در میلی لیتر

3. پروتئین ناشناخته
4. محلول نمکی (8.5 گرم در لیتر)
5. دستگاه اسپکتروفتومتر LAMBDA 465 UV / Vis
6. نرم افزار UV Lab
7. کووت (طول 10 میلی متر)

روش

1. محلولهای پروتئینی ، مخلوط کردن پروتئین و محلول نمکی را آماده کنید
2. 5 میلی لیتر از معرف رقیق شده بردفورد را به استاندارد اضافه کنید و نمونه مجهول را به مخلوط اضافه  کرده و بگذارید 5 دقیقه بماند.
3. روش Bradford را از لیست متد در بخش کمی Quantification نرم افزار  انتخاب کنید
4. در حالت استاندارد کمی ، میزان جذب استاندارد 2 تا 6 را با توجه به استاندارد 1 در طول موج 595 نانومتر اندازه گیری کنید.

اندازه گیری ها را در عرض یک ساعت انجام دهید.

5- در حالت Quantification ، مقدار ناشناخته را اندازه بگیرید

6. جذب استاندارد ها را در مقابل غلظت آنها رسم کنید.
7. غلظت نمونه ناشناخته را محاسبه کنید.

Instrument Parameters

The instrument parameters of the LAMBDA 465 are as follows:

Experiment Setup

 Data type: Absorbance

 Sampling: Single cell

Mode: Fast (Scan no. :30 / Integration no. : 1)

Experiment Method

Quantification Method: Bradford method

Wavelength used: 595 nm

Curve dimension: 1

نتیجه

آنالیز  کمی پروتئین با استفاده از  دستگاه اسپکتروفتومتر UV-VIS Lambda 465 Perkin Elmer   انجام شد

همانطور که جداول و منحنی نشان میدهد , دستگاه اسپکتروفتومتر UV-VIS Lambda 465 Perkin Elmer    با حساسیت بالا و اندازه گیری سریع طیف ها بدست آمد.

توضیح مختصر راجب پروتیین – Total Protein

دامنه پروتئین کل

محدوده طبیعی پروتئین کل بین 6 تا 8.3 گرم در دسی لیتر است (g / dL)

 این محدوده ممکن است در آزمایشگاه ها کمی متفاوت باشد. این دامنه ها همچنین به دلیل عوامل دیگری مانند:

• سن
• جنسیت
• جمعیت
• روش آزمون

نیز بستگی دارند.

پروتئین کل افزایش یافته ممکن است نشان دهنده موارد زیر باشد:

التهاب یا عفونت ، مانند هپاتیت ویروسی B یا C ، یا HIV

اختلالات مغز استخوان ، مانند میلوم متعدد یا بیماری والدنستروم

پروتئین کل کم ممکن است نشان دهنده موارد زیر باشد:

خون ریزی

اختلال کبدی

تاخیر در بهبودی بعد از جراحی

هدف از آزمایش پروتئین کل

یک آزمایش پروتئین کل به عنوان بخشی از معاینه روتین سلامتی شما انجام می شود. این یکی از آزمایشاتی است که پانل پزشکی جامع (CMP) شما را تشکیل می دهد. اگر موارد ذیل  را داشته باشید ممکن است شما دچار بیماری  پروتیین  کل باشید :

• کاهش وزن بدون دلیل
• خستگی
• ورم ، که تورم ناشی از مایعات اضافی در بافت های شما است
• علائم بیماری کلیه یا کبد

آزمایش پروتئین کل میزان کل پروتئین موجود در خون شما را اندازه گیری می کند و به طور خاص میزان آلبومین و گلوبولین را جستجو می کند.

این آزمایش همچنین به بررسی نسبت آلبومین به گلوبولین در خون شما می پردازد. این به عنوان “نسبت A / G” شناخته می شود.

اندازه گیری و تعیین Total Protein توسط دستگاه اسپکتروفتومتر Lambda UV-VIS PerkinElmer

اندازه گیری و تعیین Total Protein توسط دستگاه اسپکتروفتومتر Lambda UV-VIS PerkinElmer

اندازه گیری و تعیین Total Protein توسط دستگاه اسپکتروفتومتر Lambda UV-VIS PerkinElmer