اندازه گیری LOD و LOQ ویتامین B2 با استفاده از طیف سنج فلورسانس FL 6500 و FL 8500
اندازه گیری LOD و LOQ ویتامین B2 با استفاده از طیف سنج فلورسانس FL 6500 و FL 8500
حد تشخیص (LOD) در فلورسانس حداقل غلظت نمونه ای است که می تواند بین سیگنال پس زمینه از نمونه blank و سیگنال فلورسانس از نمونه ، که یکی از شاخص های اصلی عملکرد اسپکتروفتومتر فلورسانس است ، تشخیص دهد.
علاوه بر این ، برای تعیین حداقل غلظت نمونه قابل تشخیص ، داروسازی ایالات متحده همچنین پیشنهاد کرده است که باید حد تعیین کمی (LOQ) ، که حداقل غلظت کمی قابل اندازه گیری است که می تواند به طور دقیق و صحیح پذیرفته شود ، ارائه شود.
در این اپلیکیشن ، حد تشخیص (LOD) و حد کمی شدن (LOQ) ویتامین B2 مطابق با ASTM E-13 در طیف سنجی مولکولی با اسپکترومتر فلورسانس FL 6500 و FL 8500 تعیین شد.
اسپکتروفتومتر فلورسانس
معرف و دستگاه
- اسپکتروفتومتر فلورسانس FL 6500 و FL 8500
- آب مقطر (DW)
- کووت 10 میلی متر برای فلورسانس
- ویتامین B2 (ریبوفلاوین) [سیگما آلدریچ]
روش
A. اندازه گیری حد تشخیص LOD
- محلول استوک (1 میلی گرم در میلی لیتر) تهیه کنید.
- محلول ویتامین B2 با غلظت 10 نانوگرم در میلی لیتر در آب مقطر (DW).
3- تنظیمات اسپکتروفتومتر فلورسانس مشخص شده در جدول 1.
اسپکتروفتومتر فلورسانس FL 6500 و FL 8500 آب مقطر (DW) را در سل فلورسنت قرار داده و طیف فلورسانس را اندازه گیری کنید.
5- پس از شستن سل ، فلورسانس 10 نانوگرم در میلی لیتر ویتامین B2 را اندازه گیری کنید.
- روش فوق را 10 بار تکرار کنید تا زمینه و طیف نمونه اندازه گیری شود.
B . اندازه گیری حد تعیین کمی LOQ
- محلول ویتامین B2 را با غلظت 10 نانوگرم در میلی لیتر با آب مقطر (DW) تهیه کنید.
- 10 نانوگرم در میلی لیتر محلول ویتامین B2 را به غلظت های 0 ، 1.5 ، 2 ، 3 و 5 (نانوگرم در میلی لیتر) رقیق کنید تا حداقل غلظت قابل اندازه گیری تعیین شود.
3- در حالت کمی ، هر غلظت سه بار اندازه گیری می شود.
روش تعیین حد تشخیص ( LOD )
حد تشخیص برای نمونه با قرائت دستگاه که سیگنالی برابر با سه برابر مقدار rms نویز می دهد ، داده می شود.
طبق روش ASTM E579-04 ، حداقل غلظت تشخیص را می توان با معادله زیر بیان کرد (1).
LOD = (غلظت نمونه / S ) x (نویز rms x 3) …………….. (1)
جایی که S شدت خالص سیگنال است که پس زمینه از میانگین سیگنال در حداکثر شدت فلورسانس کم می شود.
نویز RMS را می توان با استفاده از آب مقطر (DW) به دنبال معادله (2) با استفاده از سیگنال پس زمینه دریافت کرد.
√Σ(x — x)2/( n — 1)……………………………………………………………(2)
x = mean of the series of readings
x = value of the individual reading
n = number of readings
طیف فلورسانس 1 میلی گرم در میلی لیتر ویتامین B2 در DW به دست آمده توسط اسپکتروفتومتر فلورسانس FL 8500 در شکل 1 نشان داده شده است.
طیف های نشری محلول Blank و 10 نانوگرم در میلی لیتر ویتامین B2 با استفاده از FL 6500 و FL 8500 در شکل 2 و شکل 3 نشان داده شده است.
میزان حد تشخیص LOD برای اسپکتروفتومتر فلورسانس FL 6500 و FL 8500 ، با استفاده از معادله 1 ، به ترتیب ذیل برای ویتامین B2 تعیین شد.
LOD = 0.06 ng/mL ( 0.06 PPb ) and 0.07 ng/mL ( 0.07 PPb ) Vitamin B2
روش تعیین حد کمی (LOQ)
حد تعیین کمی (LOQ) معمولاً 10 برابر انحراف استاندارد اندازه گیری های مکرر محلول خالی است.
حد کمی را می توان با معادله زیر بیان کرد
LOQ = 10 Sb/m……………………………………….
جایی که m شیب منحنی کالیبراسیون است و Sb انحراف استاندارد قرائت های Blank است.
منحنی کالیبراسیون بدست آمده پس از اندازه گیری فلورسانس محلول ویتامین B2 از 0 ، 1.5 ، 2 ، 3 و 5 (ng / mL) با استفاده از FL 6500 و FL 8500 در شکل 4 و 5 نشان داده شده است.
LOQ برای FL 6500 و FL 8500 ، با استفاده از معادله 3 و تنظیمات مشخص شده ابزار در جداول 2 ، به ترتیب 0.17 نانوگرم در میلی لیتر و 0.24 نانوگرم در میلی لیتر ویتامین B2 تعیین شد.
LOQ = 0.17 ng/mL and 0.24 ng/mL Vitamin B2
نتیجه
حد تشخیص و حد کمی ویتامین B2 با استفاده از طیف سنج فلورسانس FL 6500 و FL 8500 اندازه گیری شد.
در نتیجه ، حد تشخیص (LOD) ویتامین B2 با استفاده از FL 6500 و FL 8500 به میزان 0.06 و 0.07 نانوگرم در میلی لیتر تعیین شد و حد کمی (LOQ) به ترتیب 0/17 و 0/24 نانوگرم در میلی لیتر بود.
ویتامین B2 یا بعبارتی ریبوفلاوین در گوشت , تخم مرغ , محصولات لبنی , شیر , جگر , سبوس گندم و پیاز وجود دارد.
ویتامین B2 چه کاری انجام می دهد؟
ویتامین B2 که ریبوفلاوین نیز نامیده می شود ، یکی از 8 ویتامین B است.
تمام ویتامین های گروه B به بدن در تبدیل غذا (کربوهیدرات) به سوخت (گلوکز) که برای تولید انرژی استفاده می شود ، کمک می کنند.
این ویتامین های گروه B که غالباً به آنها ویتامین های B کمپلکس گفته می شود ، به بدن در متابولیسم چربی و پروتئین نیز کمک می کند.
اگر ویتامین B2 کافی نداشته باشید چه اتفاقی می افتد؟
کمبود ویتامین B2 کشنده نیست زیرا یک ویتامین محلول در آب است ، به این معنی که توسط بدن ذخیره و استفاده می شود.
کمبود ویتامین B2 می تواند علائم زیر را ایجاد کند: خشکی و ترک خوردگی پوست اطراف بینی و دهان.
کلیدواژه : اندازه گیری LOD و LOQ ویتامین B2 با استفاده از طیف سنج فلورسانس FL 6500 و FL 8500 , اندازه گیری ویتامین ها , آنالیز ویتامین B , انالیز ویتامین B با دستگاه اسپکتروفتومتر فلورسانس ,
دیدگاهتان را بنویسید