ستون SEC
- توضیحات
- نظرات (1)
توضیحات
ستون SEC
ستون‌ها و استانداردهای کروماتوگرافی طردی اندازه Size Exclusion Chromatography (SEC) در HPLC
شرکت رابین آزما قابلیت تامین انواع ستون از برندهای ذیل را دارد
Agilent, Waters, Thermo Fisher, Tosoh, Cytiva Life Science Dr.Maisch
Daicel, Restek, Phenomenex, Supelco, Shimadzu
YMC, Shodex, Kromasil, Osaka Soda, Nacalai Tesque
Hamilton, Welch, NanoChrom, Sepax, Sielc, Dikma
MicroSolv, Bischoff, Hichrom, ACE, GL Sciences
Hawach, MZ Analysentechnik, Wepure, HALO, Macherey-
شرکت Agilent ستونهای HPLC کروماتوگرافی طردی اندازه (SEC) را در طیف گسترده‌ای از اندازه‌های منافذ ارائه می‌دهد تا هرگونه چالش آنالیز aggregate یا fragmentرا برطرف کند.
ستونهای AdvanceBio SEC با پیوند آبدوست منحصر به فرد برای حداقل برهمکنش‌های ثانویه، در اندازه‌های ذرات 2.7 میکرومتر و 1.9 میکرومتر برای جداسازی‌های با توان عملیاتی بالا و رزولوشن بالا موجود هستند.
ستونهای کروماتوگرافی طردی اندازه (SEC) در HPLC
۱. مقدمه
کروماتوگرافی طردی اندازه (Size Exclusion Chromatography – SEC) یکی از روش‌های جداسازی مولکولی است که بر اساس اندازه نسبی ترکیبات صورت می‌پذیرد. در این روش، نمونه از میان بستر متخلخل یک ستون عبور کرده و مولکول‌های بزرگتر زودتر (بدون نفوذ عمقی) و مولکول‌های کوچکتر دیرتر (با نفوذ به منافذ) از ستون خارج می‌شوند. این جداسازی در آنالیز پروتئین‌ها، پلی‌ساکاریدها، پپتیدها و نانوذرات کاربرد فراوان دارد.
۲. استانداردها و پارامترهای کلیدی
قطر ذرات (Particle Size): معمولاً بین ۵ تا ۱۰ میکرون
اندازه منافذ (Pore Size): از ۱۰۰ تا ۲۰۰۰ آنگستروم بسته به محدوده جداسازی
ابعاد ستون: (۲۰ × 300) میلی‌متر، (10 × 300) میلی‌متر و غیره
فاز سیال متحرک: آبی یا بافر با pH کنترل‌شده
دمای کاری: ۲۵–۴۰ °C
۳. کاربردهای متداول
تعیین توزیع وزن مولکولی پلیمرها
خالص‌سازی پروتئین‌ها و پپتیدها
آنالیز اولیگو-ساکاریدها و نانوفرموله‌ها
کنترل کیفیت صنعت دارویی و غذایی
شرکت رابین آزما پارسیان؛ تأمین‌کننده برترین برندها
مجموعه رابین آزما پارسیان افتخار دارد انواع ستون SEC از معتبرترین برندهای جهانی را تأمین نماید:
, Cytiva life science, Agilent, Waters, Thermo Fisher, Tosoh, Dr.Maisch, Daicel, Restek,
Phenomenex, Supelco, Shimadzu, YMC, Shodex, Kromasil, Osaka Soda,
Nacalai Tesque, Hamilton, Welch, NanoChrom, Sepax, Sielc, Dikma,
MicroSolv, Bischoff, Hichrom, ACE, GL Sciences, Hawach,
MZ Analysentechnik, Wepure, HALO, Macherey‑Nagel
پرفروش‌ترین ستونهای SEC و مشخصات فنی
| برند | محصول | کد فنی | قطر ذرات | اندازه منافذ | ابعاد ستون (قطر×طول) | کاربرد اصلی |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Tosoh | TSKgel G3000SWXL | 009854 | 5 µm | 250 Å | 7.8 × 300 mm | جداسازی پروتئین تا MW 500 kDa |
| Waters | XBridge SEC (200 Å) | 186006019 | 5 µm | 200 Å | 4.6 × 300 mm | آنالیز پلی‌ساکاریدها |
| Agilent | PL aquagel-OH 300 | PL1184-6300 | 8 µm | 300 Å | 7.5 × 300 mm | توزیع وزن مولکولی پلیمرها |
| Phenomenex | BioSep-SEC-S4000 | 00G-4102-E0 | 5 µm | 400 Å | 7.8 × 300 mm | آنالیز پپتیدها و پروتئین‌ها |
| Shodex | KW-803 (300 Å) | 264-02235-02 | 6 µm | 300 Å | 8 × 300 mm | خالص‌سازی نانوذرات |
| YMC | YMC-Pack Diol SEC | D2006 | 5 µm | 200 Å | 7.5 × 300 mm | آنالیز لیپیدها |
| Supelco | SRT-SEC (1000 Å) | 57945-U | 10 µm | 1000 Å | 7.8 × 300 mm | جداسازی اجزای خیلی بزرگ |
| Shimadzu | Shim-pack SIL-SEC-4A | 227-34532-91 | 5 µm | 400 Å | 4.6 × 300 mm | آنالیز پپتیدها و آنزیم‌ها |
| Hamilton | PRP-X100 (SEC mode) | 7150-03 | 10 µm | 100 Å | 4.6 × 250 mm | جداسازی اسیدهای آلی |
| Dr.Maisch | BioSEC | BIOSEC-5 | 5 µm | 1000 Å | 8 × 300 mm | آنالیز توزیع وزن مولکولی |
نکته: کدهای فنی ممکن است بسته به ابعاد و دبی کاری تغییر کنند. برای دریافت مشاوره دقیق‌تر، تماس بگیرید.
کمپانی Agilent Technologies یکی از برندهای معتبر در زمینه کروماتوگرافی است که ستونهای SEC (Size Exclusion Chromatography) خود را بیشتر تحت برند “PLgel” و “AdvanceBio SEC” عرضه می‌کند. این ستون‌ها برای آنالیز پلیمرها، پروتئین‌ها و ماکرومولکول‌ها طراحی شده‌اند و از نظر دقت، پایداری و تکرارپذیری در سطح بالایی قرار دارند.
✅ پرفروش‌ترین ستونهای SEC از برند Agilent به همراه کد فنی:
| نام محصول | کد فنی (Part Number) | مشخصات فنی | کاربرد |
|---|---|---|---|
| AdvanceBio SEC 300Å, 2.7 µm, 7.8 x 300 mm | 5190-9417 | 2.7 µm, 300 Å, 7.8 × 300 mm | آنالیز پروتئین‌ها و مونوکلونال آنتی‌بادی‌ها (mAbs) |
| AdvanceBio SEC 130Å, 2.7 µm, 7.8 x 300 mm | 5190-9401 | 2.7 µm, 130 Å, 7.8 × 300 mm | جداسازی پپتیدها و پروتئین‌های کوچک |
| PLgel 5 µm MIXED-C, 7.5 x 300 mm | PL1110-6525 | 5 µm, گستره منافذ ترکیبی، 7.5 × 300 mm | آنالیز پلیمرها با وزن مولکولی متنوع |
| PL aquagel-OH 30, 8 µm, 7.5 x 300 mm | PL1149-6830 | 8 µm, 300 Å, 7.5 × 300 mm | پلیمرهای آبدوست، پلی‌ساکاریدها |
| PL aquagel-OH MIXED-H, 8 µm, 7.5 x 300 mm | PL1149-6830 | 8 µm, MIXED pore, 7.5 × 300 mm | توزیع وزنی گسترده، محلول‌های آبی |
| AdvanceBio SEC Guard Column | 5190-9418 | 2.7 µm, 300 Å, 4.6 × 50 mm | محافظ ستون، افزایش طول عمر ستون اصلی |
🔬 نکات مهم در انتخاب ستونهای SEC از Agilent:
ستونهای AdvanceBio مناسب محیط‌های بیولوژیکی و آبی با حساسیت بالا هستند.
ستونهای PLgel و aquagel-OH بیشتر برای آنالیز پلیمرها و ترکیبات سنتزی کاربرد دارند.
Agilent تنوع زیادی از ستون‌ها با اندازه منافذ مختلف (100Å تا 1000Å) ارائه می‌دهد.
🔬 ستونهای SEC برند TOSOH
✅ سری محبوب: TSKgel SW / SWXL / GFC Columns
کمپانی Tosoh Bioscience یکی از پیشگامان جهانی در تولید ستونهای SEC به‌ویژه برای آنالیزهای بیولوژیکی و پروتئینی است. ستونهای TSKgel SWXL از دقیق‌ترین و پرکاربردترین ستون‌ها برای جداسازی پروتئین‌ها، mAbها، الیگومرها و پلیمرهای آبدوست هستند.
⭐ ویژگی‌ها:
فاز ثابت مبتنی بر سیلیکا با اصلاح دی‌ال
برای آنالیز در فاز متحرک آبی یا بافرهای زیست‌سازگار
توان تفکیک بالا در محدوده ۱۰ تا ۷۰۰ کیلو دالتون
تکرارپذیری بالا و عمر طولانی
📌 پرفروش‌ترین ستونهای SEC از Tosoh:
| نام ستون | کد فنی (Part No.) | اندازه منافذ | قطر ذرات | ابعاد (mm) | کاربرد اصلی |
|---|---|---|---|---|---|
| TSKgel G3000SWXL | 08541 | 250 Å | 5 µm | 7.8 × 300 | mAb، پروتئین‌های ۱۰-۵۰۰ kDa |
| TSKgel G2000SWXL | 08543 | 125 Å | 5 µm | 7.8 × 300 | پپتیدها و پروتئین‌های کوچک |
| TSKgel G4000SWXL | 08540 | 450 Å | 5 µm | 7.8 × 300 | پروتئین‌های سنگین و آنتی‌بادی |
| TSKgel SuperSW3000 | 23212 | 250 Å | 4 µm | 4.6 × 300 | SEC سریع با حساسیت بالا |
| TSKgel G3000PWXL | 08020 | 200 Å | 7 µm | 7.8 × 300 | پلیمرهای محلول در آب |
🔬 ستونهای SEC برند Waters
✅ سری محبوب: XBridge Protein SEC و ACQUITY UPLC BEH SEC
Waters به‌عنوان یکی از رهبران فناوری LC، ستون‌هایی با کیفیت بالا برای آنالیز SEC ارائه می‌دهد. محصولات این برند در آزمایشگاه‌های زیستی و دارویی به‌طور گسترده استفاده می‌شوند.
⭐ ویژگی‌ها:
سازگاری کامل با HPLC و UPLC
عملکرد بالا در جداسازی mAb، ADC، الیگومرها و ویروس‌ها
ستونهای UPLC با ذرات sub-2 µm برای قدرت تفکیک بسیار بالا
سازگاری با طیف وسیعی از بافرهای زیست‌سازگار
📌 پرفروش‌ترین ستونهای SEC از Waters:
| نام ستون | کد فنی (Part No.) | قطر ذرات | اندازه منافذ | ابعاد (mm) | کاربرد اصلی |
|---|---|---|---|---|---|
| XBridge Protein SEC 200Å | 186009325 | 3.5 µm | 200 Å | 7.8 × 300 | آنالیز پروتئین‌های 10–500 kDa |
| XBridge Protein SEC 450Å | 186009327 | 3.5 µm | 450 Å | 7.8 × 300 | mAb و کمپلکس‌های بزرگ |
| ACQUITY UPLC BEH200 SEC | 186005225 | 1.7 µm | 200 Å | 4.6 × 150 | آنالیز دقیق در سیستم‌های UPLC |
| XBridge SEC Guard Column | 186009334 | 3.5 µm | – | 7.8 × 50 | محافظ ستون و افزایش عمر ستون |
✅ مقایسه کلی Waters vs Tosoh در SEC:
| ویژگی | TOSOH (TSKgel) | Waters (XBridge/BEH) |
|---|---|---|
| تخصص در آنالیز پروتئین | بسیار بالا | بسیار بالا |
| گزینه‌های UPLC | محدود | دارد (BEH200 SEC) |
| دوام ستون | بالا | بسیار بالا |
ستون PROTEEMA SEC Agilent
ستونهای PROTEEMA برای آنالیز کروماتوگرافی طردی اندازه (SEC) پروتئین‌های طبیعی و مصنوعی، پپتیدها و آنزیم‌ها با وزن مولکولی از ۱۰۰ تا ۷,۵۰۰,۰۰۰ دالتون بسیار مناسب هستند. ستونهای PROTEEMA در پیکربندی bioinert موجود هستند.
مزایای ستونهای PROTEEMA SEC
- پایداری عالی در طیف وسیعی از محیط‌های فیزیکی، شیمیایی و بیولوژیکی
- Diol SEC chemistry (L20)
- توزیع باریک اندازه ذرات که به راندمان عالی کمک می‌کند
ستونهای زیستی AdvanceBio SEC HPLC
ستونهای AdvancedBio SEC HPLC، اندازه‌گیری کمی دقیق و درستی را برای تجزیه و تحلیل تجمعی و قطعه‌ای پپتیدها، آنتی‌بادی‌های مونوکلونال و زیست‌درمانی‌های نسل بعدی ارائه می‌دهند.
این ستونهای کروماتوگرافی جداسازی اندازه نوآورانه توسط Agilent طراحی و مهندسی شده‌اند تا با ارائه روش‌های قوی و قابل اعتماد که تجزیه و تحلیل مجدد نمونه را از بین می‌برند، بهره‌وری آزمایشگاه را بهبود بخشند.
نتایج ثابت از ستونی به ستون دیگر، دسته‌ای به دسته دیگر و آزمایشگاهی به آزمایشگاه دیگر حاصل می‌شود و اطمینان حاصل می‌شود که روش‌ها می‌توانند در بخش‌ها و مکان‌های مختلف منتقل شوند تا به عدم قطعیت پایان دهند.
ستونهای AdvanceBio SEC 2.7 میکرومتری، ستونهای قوی برای نیازهای معمول SEC هستند که دارای یک پوشش آبدوست hydrophilic منحصر به فرد برای به حداقل رساندن تعاملات ثانویه بین نمونه و فاز ثابت می‌باشند.
حتی برای نمونه‌های چسبنده مانند ترکیبات آنتی‌بادی-دارو (ADC)، این ستون تعاملات ثانویه را برای پاسخ‌های دقیق به حداقل رسانده است.
در ابتدا در دو اندازه منافذ، ۳۰۰ آنگستروم و ۱۳۰ آنگستروم ارائه می‌شوند و برای تجزیه و تحلیل تجمعی حساس و بسیار تکرارپذیر پروتئین‌ها و پپتیدها ایده‌آل هستند.
جدیدترین ستونهای AdvanceBio SEC 2.7 µm، اندازه منافذ بزرگتر ۵۰۰ آنگستروم و ۱۰۰۰ آنگستروم را ارائه می‌دهند که برای تجزیه و تحلیل قوی و با وضوح بالای تجمع ویروس‌های مرتبط با آدنو (AAV) و ذرات شبه ویروس (VLP) توسعه یافته و بهینه شده‌اند.
ستونهای AdvanceBio SEC 1.9 µm، جداسازی‌های SEC شما را به سطح بالاتری ارتقا می‌دهند.
اندازه ذرات کوچکتر و شیمی آبدوست hydrophilic منجر به جداسازی‌های با راندمان بالا و وضوح بالا می‌شود. پایداری تا ۶۲۰ بار، سرعت جریان سریع‌تر را برای نیازهای با توان عملیاتی بالا امکان‌پذیر می‌کند.
اندازه منافذ ۲۰۰ آنگستروم به طور خاص برای جداسازی همزمان دیمر، مونومر و قطعه برای توصیف کامل آنتی‌بادی مونوکلونال بهینه شده است.
ستونهای زیستی Bio SEC-3 HPLC
ستونهای Bio SEC-3 HPLC برای کروماتوگرافی جداسازی اندازه (SEC) با ذرات سیلیس کروی و با پراکندگی باریک ۳ میکرومتری که با یک لایه آبدوست اختصاصی پوشانده شده‌اند، پر شده‌اند.
این لایه پلیمری نازک تحت شرایط کنترل‌شده به صورت شیمیایی به سیلیس خالص و از نظر مکانیکی پایدار متصل شده است و یک ذره جداسازی اندازه کارآمد را تضمین می‌کند.
ستونهای Bio SEC-3 HPLC در اندازه‌های منافذ ۱۰۰، ۱۵۰ و ۳۰۰ آنگستروم موجود هستند تا بتوانند اکثر جداسازی‌های جداسازی اندازه پپتید و پروتئین را انجام دهند.
ستونهای زیستی Bio SEC-5 HPLC
ستونهای کروماتوگرافی طردی اندازه (SEC) Bio SEC-5 HPLC با ذرات سیلیس 5 میکرومتری پوشیده شده با یک لایه اختصاصی، خنثی و آبدوست برای حداکثر کارایی و پایداری، بسته‌بندی شده‌اند.
بسته‌بندی ویژه طراحی شده همچنین حجم منافذ بالایی را افزایش می‌دهد و هم ظرفیت پیک و هم وضوح را بهبود می‌بخشد.
ستونهای Bio SEC-5 HPLC در ابعاد 100، 150، 300، 500، 1000 و 2000 آنگستروم موجود است.
🔬 ستون SEC برند Thermo Fisher Scientific
Thermo Fisher ستونهای SEC را تحت برندهای زیر تولید یا عرضه می‌کند:
Acclaim SEC Columns
MAbPac SEC Columns
Vanquish SEC (UPLC compatible)
⭐ ویژگی‌ها:
مناسب برای پروتئین‌ها، مونوکلونال آنتی‌بادی‌ها (mAbs)، الیگومرها
تفکیک بالا، پیک‌های متقارن و reproducibility عالی
سازگاری کامل با سیستم‌های UHPLC / HPLC
📌 پرفروش‌ترین مدل‌ها از Thermo Fisher:
| نام ستون | کد فنی (Part Number) | قطر ذرات | اندازه منافذ | ابعاد | کاربرد |
|---|---|---|---|---|---|
| MAbPac SEC-1, 300Å | 074699 | 5 µm | 300 Å | 4.0 × 300 mm | mAb، پروتئین |
| MAbPac SEC-1, 1000Å | 074700 | 5 µm | 1000 Å | 4.0 × 300 mm | کمپلکس‌های بزرگ |
| Acclaim SEC-300 | 074208 | 5 µm | 300 Å | 4.6 × 300 mm | پروتئین و پپتید |
| Vanquish SEC-300 | VF-SEC-300 | 2 µm | 300 Å | 2.1 × 150 mm | UPLC پروتئین‌ها |
🔬 ستون SEC برند Cytiva (Life Sciences)
Cytiva (با نام قبلی GE Healthcare) ستونهای خود را تحت برند معروف Superdex و Sephacryl عرضه می‌کند.
⭐ ویژگی‌ها:
مبتنی بر ژل فیلتراسیون (ژل filtration-grade media)
کاربرد گسترده در پروتئین خالص‌سازی و توزیع وزنی
سازگار با FPLC، HPLC و آنالیز بیولوژیکی
📌 پرفروش‌ترین مدل‌ها از Cytiva:
| نام ستون | کد فنی (Part Number) | قطر ذرات | محدوده جداسازی (MW) | ابعاد | کاربرد |
|---|---|---|---|---|---|
| Superdex 200 Increase 10/300 GL | 28990944 | 8.6 µm | 10k–600k Da | 10 × 300 mm | پروتئین، IgG |
| Superdex 75 Increase 10/300 GL | 28990933 | 8.6 µm | 3k–70k Da | 10 × 300 mm | پپتید و پروتئین سبک |
| Sephacryl S-200 HR | 17015301 | 50–150 µm | 5k–250k Da | رزین (بسته‌بندی) | FPLC/Prep |
🔻 مقایسه اجمالی:
| برند | مناسب برای | مزیت کلیدی |
|---|---|---|
| Thermo | mAb، پلیمر، پروتئین | قدرت تفکیک بالا، قیمت مناسب |
| Waters | پروتئین، ADC، UPLC | گزینه‌های UPLC و سازگاری با بافر |
| Cytiva | پروتئین، تخلیص زیستی | رزین‌های تخصصی برای Bioprocess |
🔬 انواع ستونهای SEC از برند Phenomenex
Phenomenex دو خط اصلی ستون SEC دارد:
✅ 1. BioSep-SEC Columns (فاز آبی – بیولوژیکی)
مخصوص آنالیز پروتئین‌ها، الیگومرها، آنتی‌بادی‌ها و ترکیبات زیستی در فاز متحرک آبی یا بافرهای زیست‌سازگار (PBS، فسفات، NaCl و …).
ویژگی‌ها:
فاز ثابت مبتنی بر سیلیکا اصلاح‌شده (Diol bonded)
مناسب برای آنالیزهای غیرتخریبی
قابل استفاده در HPLC کلاسیک
مدل‌های محبوب:
| نام ستون | کد فنی (Part Number) | قطر ذرات | اندازه منافذ | ابعاد | محدوده MW مناسب |
|---|---|---|---|---|---|
| BioSep-SEC-S2000 | 00H-2145-K0 | 5 µm | 125 Å | 7.8 × 300 mm | 1k–100k Da |
| BioSep-SEC-S3000 | 00H-2146-K0 | 5 µm | 290 Å | 7.8 × 300 mm | 1k–500k Da |
| BioSep-SEC-S4000 | 00H-2147-K0 | 5 µm | 500 Å | 7.8 × 300 mm | 10k–700k Da |
| BioSep-SEC-S2000 Guard | AJ0-9943 | 5 µm | 125 Å | 7.8 × 50 mm | ستون محافظ |
✅ 2. Phenogel Columns (فاز آلی – پلیمری)
مخصوص آنالیز پلیمرها و مواد آلی با وزن مولکولی بالا در فاز متحرک آلی مانند THF، DMF، CHCl₃ و …
ویژگی‌ها:
پایه پلیمر اصلاح‌شده (crosslinked polystyrene-divinylbenzene)
مقاوم در برابر حلال‌های آلی شدید
مناسب برای GPC / SEC پلیمری
مدل‌های محبوب:
| نام ستون | کد فنی (Part Number) | قطر ذرات | اندازه منافذ | ابعاد | محدوده MW مناسب |
|---|---|---|---|---|---|
| Phenogel 5µm 10⁴ Å | 00G-4057-E0 | 5 µm | 10000 Å | 7.8 × 300 mm | 10k–10M Da |
| Phenogel Mixed Bed | 00G-4035-E0 | 5 µm | MIXED | 7.8 × 300 mm | طیف گسترده وزن مولکولی |
| Phenogel Guard Column | AJ0-9340 | 5 µm | – | 7.8 × 50 mm | محافظ ستون |
📌 پرفروش‌ترین ستونهای SEC برند Phenomenex:
| نام ستون | کد فنی | کاربرد اصلی |
|---|---|---|
| BioSep-SEC-S3000 | 00H-2146-K0 | آنالیز mAb، پروتئین‌ها، کمپلکس زیستی |
| BioSep-SEC-S2000 | 00H-2145-K0 | پپتیدها و پروتئین‌های کوچک |
| Phenogel Mixed Bed | 00G-4035-E0 | آنالیز پلیمرهای متنوع در فاز آلی |
| Phenogel 10⁴ Å | 00G-4057-E0 | پلیمرهای سنگین تا 10M Da |
✅ مزایای ستونهای SEC Phenomenex:
دقت بالا در جداسازی وزن مولکولی
طیف وسیع اندازه منافذ برای انواع آنالیت‌ها
موجود بودن نگهدارنده‌ها (Guard Column)
ستون SEC چگونه کار می‌کند؟
کروماتوگرافی طرد اندازه Size exclusion chromatography (SEC) بر اساس توانایی اجزای نمونه با اندازه‌های مختلف برای مهاجرت به داخل و خارج از منافذ روی فاز ساکن به میزان‌های مختلف است.
در حالت ایده‌آل، هیچ برهمکنش بین مولکولی بین نمونه و فاز ساکن وجود ندارد.
آنالیت‌های بزرگتر قادر به حرکت به اندازه آنالیت‌های کوچکتر به داخل منافذ نیستند، بنابراین زمان کمتری را در منافذ می‌گذرانند و زودتر از ستون شسته می‌شوند.
آنالیت‌های کوچکتر می‌توانند به طور مؤثرتری وارد منافذ شوند، بنابراین زمان بیشتری را در آنجا می‌گذرانند و دیرتر از ستون شسته می‌شوند.
انتخاب اندازه منافذ مناسب SEC برای پروتئین‌ها
تعیین اندازه منافذ مناسب احتمالاً مهمترین جنبه انتخاب ستون SEC است.
از آنجا، می‌توانید ابعاد را بر اساس نیازهای رزولوشن، توان عملیاتی، حجم تزریق و حساسیت خود انتخاب کنید.
جداسازی SEC توسط تفاوت در شعاع هیدرودینامیکی بین آنالیت‌ها یا اندازه آنالیت‌ها در محلول هدایت می‌شود.
برای پروتئین‌های کروی، اندازه در محلول معمولاً با وزن مولکولی همبستگی خوبی دارد.
ستون SEC چیست؟
SEC مخفف کروماتوگرافی طرد اندازه size exclusion chromatography است.
SEC یک تکنیک کروماتوگرافی ایزوکراتیک است که آنالیت‌ها را بر اساس اندازه آنها در محلول جدا می‌کند.
آنالیت‌ها با اندازه‌های مختلف به داخل و خارج از منافذ روی فاز ساکن به میزان‌های مختلف مهاجرت می‌کنند.
آنالیت‌های بزرگتر قادر به سفر به داخل منافذ به اندازه آنالیت‌های کوچکتر نیستند، بنابراین زمان کمتری را در منافذ می‌گذرانند و زودتر از ستون شسته می‌شوند.
در مقابل، آنالیت‌های کوچکتر می‌توانند به طور مؤثرتری وارد منافذ شوند، بنابراین زمان بیشتری را در آنجا می‌گذرانند و دیرتر از ستون شسته می‌شوند.
دانشمندان معمولاً از SEC برای اندازه‌گیری تجمع پروتئین‌ها در محلول استفاده می‌کنند.
چه زمانی از کروماتوگرافی طرد size exclusion chromatography اندازه استفاده می‌کنید؟
SEC در درجه اول برای آنالیز اندازه پلیمرهای بزرگ، از جمله بیوپلیمرهایی مانند پپتیدها، پروتئین‌ها یا الیگونوکلئوتیدها استفاده می‌شود.
این روش معمولاً برای اندازه‌گیری تجمع مولکول‌های زیست‌درمانی و همچنین محصولات تخریب یا توزیع اندازه آنالیت‌ها استفاده می‌شود.
تجمع یک ویژگی کیفی حیاتی مولکول‌های زیست‌درمانی است و بنابراین در طول توسعه محصول و کنترل کیفیت به دقت مورد بررسی قرار می‌گیرد.
چه چیزهایی را می‌توانم با ستونهای کروماتوگرافی SEC جدا کنم؟
به طور کلی، برای پروتئین‌های کروی، اختلاف 2 برابری در وزن مولکولی برای جداسازی پایه با SEC ضروری است.
با وجود 2 برابر بودن وزن مولکولی، یک دیمر پروتئین تنها حدود ۲۵٪ بزرگتر از یک مونومر پروتئین بر اساس اندازه در محلول (شعاع هیدرودینامیکی) است.
با این حال، با اندازه منافذ مناسب، مونومرها و دیمرها معمولاً به خوبی تفکیک می‌شوند.
قطعاتی که فقط کمی کوچکتر از یکدیگر هستند، یا تجمعات مرتبه بالاتر با اختلاف کمتر از 2 برابر در وزن مولکولی خود (مانند دیمرها در مقابل تریمرها)، ممکن است همیشه به طور کامل تفکیک نشوند.
با این حال، همبستگی وزن مولکولی برای همه انواع نمونه‌ها به خوبی برقرار نیست.
الیگونوکلئوتیدهای تک رشته‌ای در مقابل 2 رشته‌ای، که در آنها وزن مولکولی 2 برابر شده است، ممکن است از نظر اندازه در محلول بسیار مشابه باشند و جداسازی آنها می‌تواند دشوار باشد.
ستون SEC HPLCچیست؟
ستون کروماتوگرافی جداسازی اندازه (SEC) یک ستون کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) است که آنالیت‌ها را بر اساس اندازه جدا می‌کند.
این ستون از یک محفظه استوانه‌ای شکل ساخته شده است که با ذرات متخلخل پر شده است و به عنوان فاز ساکن عمل می‌کند.
اندازه منافذ تعیین می‌کند که چه طیف وسیعی از اندازه‌های آنالیت را می‌توان توسط آن ستون جدا کرد.
برای جداسازی پروتئین‌ها از چه اندازه منافذ SEC باید استفاده کنم؟
برای پروتئین‌های کروی، اندازه در محلول معمولاً با وزن مولکولی همبستگی خوبی دارد.
ستونهای SEC معمولاً محدوده وزن مولکولی دارند که برای آن توصیه می‌شوند.
برای آنتی‌بادی‌های مونوکلونال (mAbs) و پروتئین‌های مرتبط مانند ADCها یا bispecificها، اندازه منافذ 200 تا 300 آنگستروم رایج است.
برای پروتئین‌ها یا پپتیدهای کوچکتر مانند انسولین یا GLP-1، 100 تا 150 آنگستروم بیشتر استفاده می‌شود.
Agilent ستون 500 آنگستروم AdvanceBio SEC را برای AAVها و ستونهای با اندازه منافذ بزرگتر را برای آنالیت‌های بزرگتر، مانند ذرات ویروس مانند (VLPها) توصیه می‌کند.
از چه اندازه منافذ SEC باید برای جداسازی الیگونوکلئوتیدها استفاده کنم؟
از آنجا که پروتئین‌های کروی globular و الیگونوکلئوتیدها در محلول شکل‌های بسیار متفاوتی دارند، همبستگی وزن مولکولی به اندازه منافذ SEC که برای پروتئین‌های کروی توسعه داده شده است، نمی‌تواند برای الیگوها استفاده شود. الیگوهای دو رشته‌ای به ویژه کشیده‌تر از پروتئین‌ها هستند، بنابراین در وزن مولکولی یکسان به اندازه منافذ بزرگتری نیاز دارند. الیگوهای تک رشته‌ای انعطاف‌پذیری ساختاری بیشتری دارند و می‌توانند در محلول نسبت به الیگوهای دو رشته‌ای با طول توالی یکسان، کوچکتر تا شوند. با استفاده از نردبان‌های DNA و RNA، در این یادداشت کاربردی مشخص کرده‌ایم که کدام اندازه منافذ SEC برای الیگوهای مختلف مناسب است.
ابعاد ستون SEC چقدر است؟
به طور سنتی، بسیاری از SEC های تحلیلی با استفاده از ستونهای 7.8 × 300 میلی‌متری انجام شده‌اند، و گاهی اوقات حتی دو ستون از این ستون‌ها را برای افزایش وضوح به صورت سری ترکیب کرده‌اند.
با بهبود فازهای ثابت SEC جدیدتر که امکان جداسازی با وضوح بالاتر با تعاملات ثانویه کمتر را فراهم می‌کنند، برخی از کاربران برای دستیابی به روش‌های سریع‌تر و توان عملیاتی بالاتر، به ستونهای کوتاه‌تر 150 میلی‌متری روی آورده‌اند.
تحقیقات زیست‌مولکول به طور فزاینده‌ای بر روی انواع نمونه‌هایی متمرکز شده است که به دست آوردن آنها در حجم‌ها یا غلظت‌های زیاد دشوارتر است و حساسیت را به یک چالش تبدیل می‌کند.
در این سناریو، کاربران اغلب ستونهای قطر داخلی (ID) باریک‌تر، مانند 4.6 میلی‌متر یا گاهی اوقات حتی 2.1 میلی‌متر را ترجیح می‌دهند.
این ستون‌ها با حجم تزریق کمتر بهتر کار می‌کنند و با سرعت جریان کمتری کار می‌کنند، بنابراین نمونه‌ها زمان بیشتری را در آشکارساز می‌گذرانند و در نتیجه حساسیت بالاتری دارند.
مقیاس آماده‌سازی SEC به حجم نمونه‌ای که باید خالص‌سازی شود بستگی دارد، اما اغلب با استفاده از یک ستون 21.2 × 300 میلی‌متری یا یک ستون خودبسته حتی بزرگتر انجام می‌شود.
چه فاز متحرکی را باید انتخاب کنم؟
انتخاب فاز متحرک می‌تواند به نمونه شما بستگی داشته باشد، اما به عنوان نقطه شروع هنگام استفاده از ستونهای Agilent AdvanceBio SEC برای پروتئین‌ها، یک بافر فسفات ۱۵۰ میلی‌مولار با pH 7 توصیه می‌شود.
هم pH و هم قدرت یونی می‌توانند بر ساختار مولکول‌های زیستی و همچنین شکل پیک جداسازی SEC تأثیر بگذارند.
بنابراین، توصیه می‌شود pH و قدرت یونی مختلف را بررسی کنید و پایداری نمونه و حد pH ستون (۸.۵ برای ستونهای AdvanceBio SEC) را به خاطر داشته باشید.
شما به دنبال شرایطی هستید که ترکیب بهینه‌ای از وضوح بالا، دنباله پیک کم و ارتفاع پیک بالا را ارائه دهد.
به عنوان یک قاعده، اگر از فاز متحرکی استفاده کنید که قدرت یونی آن خیلی کم باشد (معمولاً کمتر از ۷۵ میلی‌مولار)، خطر برهمکنش‌های ثانویه یونی وجود دارد که می‌تواند جداسازی را به خطر بیندازد
. با این حال، اگر قدرت یونی خیلی زیاد باشد، برهمکنش‌های ثانویه آبگریز می‌توانند رخ دهند.
آیا می‌توانم از حلال‌های آلی در فاز متحرک استفاده کنم؟
از نظر شیمیایی، بله، ستونهای Agilent AdvanceBio SEC با حلال‌های آلی سازگار هستند.
با این حال، هنگام استفاده از حلال‌های آلی، باید به حلالیت اجزای بافر و فشار سیستم توجه زیادی داشته باشید.
توصیه می‌شود درصد حلال آلی کمتر از 50٪ باشد، اگرچه ≤ 20٪ رایج‌تر است.
هنگام استفاده از حلال‌های آلی، ویسکوزیته فاز متحرک بسیار بیشتر از ویسکوزیته هنگام استفاده از فازهای متحرک آبی 100٪ خواهد بود.
این بدان معناست که ستون احتمالاً باید با سرعت جریان کاهش یافته کار کند و سرعت جریان به تدریج افزایش یابد.
هنگام نصب ستون یا شروع جریان، سرعت جریان باید به آرامی طی چند دقیقه، از 0 میلی‌لیتر در دقیقه تا جریان عملیاتی مورد نظر، افزایش یابد.
در صورت امکان، حداکثر گرادیان جریان باید روی 0.1 میلی‌لیتر در دقیقه در دقیقه تنظیم شود.
علاوه بر این، از تنظیم حداکثر فشار روش در روش LC استفاده کنید تا مطمئن شوید که ستون بیش از حد فشار وارد نمی‌کند.
از کدام استاندارد پروتئین می‌توان برای آزمایش ستون SEC من استفاده کرد؟
در حالت ایده‌آل، یک استاندارد SEC هم حد مجاز و هم نقطه نفوذ کل ستون را مشخص می‌کند.
برای ستونهای Agilent AdvanceBio SEC 300 Å، استاندارد پروتئین Agilent AdvanceBio SEC 300 Å توصیه می‌شود.
این استاندارد همچنین می‌تواند با ستونهای Agilent AdvanceBio SEC 200 Å استفاده شود.
برای ستونهای Agilent AdvanceBio SEC 130 Å، استاندارد پروتئین AdvanceBio SEC 130 Å توصیه می‌شود.
همچنین می‌توان از استانداردهای مناسب بودن سیستم که خواص مشترکی با نمونه هدف شما دارند، مانند استاندارد مرجع آنتی‌بادی مونوکلونال آنتی‌بادی مونوکلونال Agilent NIST هنگام کار با آنتی‌بادی‌های مونوکلونال استفاده کرد.
استفاده از استانداردهایی که مربوط به آنالیت‌های مورد نظر هستند، توصیه می‌شود.
ستون SEC من چقدر باید دوام بیاورد؟ چند تزریق می‌توانم انتظار داشته باشم؟
پیش‌بینی طول عمر ستون بسیار دشوار است و می‌تواند تحت تأثیر عوامل مختلفی قرار گیرد.
ستون‌هایی که حاوی ذرات فاز ثابت مبتنی بر سیلیس هستند و در شرایط آبی کار می‌کنند، با گذشت زمان خراب می‌شوند.
اگر فاز آبی pH یا دمای بالاتری داشته باشد، خراب شدن می‌تواند سریع‌تر اتفاق بیفتد.
علاوه بر این، ستونهای SEC مانند اکثر انواع دیگر ستونهای LC در معرض شرایط شستشوی گرادیان قرار نمی‌گیرند، به این معنی که می‌توانند راحت‌تر آلوده شوند.
نمونه‌هایی که حاوی مواد شوینده یا سورفکتانت‌ها هستند ممکن است رسوباتی را روی سطح ذرات فاز ثابت باقی بگذارند که با گذشت زمان جمع می‌شوند و در نهایت ویژگی‌های ستون را تغییر می‌دهند.
نمونه‌هایی که حاوی آلودگی ذرات هستند می‌توانند باعث گرفتگی ستون‌ها (و فریت‌های ورودی) شوند و منجر به افزایش فشار شوند.
حتی کار کردن ستون با سرعت جریان معمولی، اما با یک فاز متحرک بسیار چسبناک (مانند 20٪ اتانول)، می‌تواند به ستون آسیب زودرس وارد کند.
انتخاب ایده‌آل آشکارساز برای SEC چیست؟
آشکارساز ایده‌آل به نمونه شما و هدف آنالیز شما بستگی دارد. آشکارسازهای فرابنفش (UV)، فلورسانس، پراکندگی نور، ضریب شکست (RI) و طیف‌سنجی جرمی (MS) همگی به طور منظم با SEC استفاده می‌شوند:
تشخیص UV در طول موج 220 نانومتر معمولاً مورد استفاده قرار می‌گیرد، به ویژه برای پروتئین‌ها. با این حال، فاز متحرک شما نباید حاوی اجزای بافری باشد که در این طول موج جذب می‌کنند. علاوه بر این، 280 نانومتر معمولاً در تشخیص UV استفاده می‌شود اما تقریباً 10 برابر کمتر از 220 نانومتر حساس است.
فلورسانس معمولاً برای افزایش حساسیت هنگام تجزیه و تحلیل نمونه‌های کمیاب، مانند AAVها، استفاده می‌شود.
تشخیص RI ممکن است برای مولکول‌هایی که کروموفور UV ندارند، استفاده شود.
پراکندگی نور Light scattering معمولاً برای به دست آوردن داده‌های اندازه یا وزن مولکولی مولکول‌های به خصوص بزرگ (با قطر بیش از 10 نانومتر) استفاده می‌شود.
SEC-MS می‌تواند وزن مولکولی را به طور دقیق تعیین کند، اگرچه به یک فاز متحرک فرار نیاز دارد. یک بافر فرار مانند استات آمونیوم معمولاً برای MS بومی استفاده می‌شود.
Family | User Guides |
| Biomolecule Sample Preparation | AdvanceBio Spin Columns and 96-Sample Plates |
| Affinity | Compiled Affinity User Guide Covering: |
- Bio-Monolith rProtein A
- Bio-Monolith Protein A
- Bio-Monolith Protein G
Reversed PhaseCompiled Reversed Phase User Guide
Covering:
- AdvanceBio RP-mAb
- PLRP-S
- ZORBAXRRHD- Wide Pore
- ZORBAX 300StableBond
- Poroshell 300
- AdvanceBio Peptide Mapping
- AdvanceBio Peptide Plus
- AdvanceBio Oligonucleotide
- AdvanceBio Amino Acid Analysis columns
AdvanceBio Desalting-RP Cartridges
ZORBAX Amino Acid Analysis
Varitide Data Sheet
Capillary LC User Guide
ZORBAX AAA Kit InstructionsHILICAdvanceBio Amide HILIC
AdvanceBio MS Spent Media
AdvanceBio Glycan Mapping
ZORBAX RRHD 300-HILICSize ExclusionAdvanceBio SEC
Bio SEC-3
Bio SEC-5
ProSEC 300S
ZORBAX GF250
ZORBAX GF450Ion ExchangeCompiled Ion Exchange User Guide
Covering:
- Bio mAb
- PL-SAX
- PL-SCX
- Bio-Monolith (QA, DEAE, and SO3) columns
Bio IEX Columns Data Sheet
ZORBAX SAX Data Sheet
ZORBAX SCX Data SheetHydrophobic Interaction Chromatography (HIC)AdvanceBio HICBio LC Guard ColumnsAgilent Analytical and Semipreparative Guard User GuideBio LC Preperative Columns
PLRP-S, PL-SAX, and PL-SCX Preparative LC Columns User Guide
PLRP-S Data Sheet
PL-SAX Data Sheet
PL-SCX Data Sheet
خرید ستون SEC، قیمت ستون SEC، ستون Size Exclusion، ستون SEC Agilent، AdvanceBio SEC، ستون HPLC SEC، ستون SEC پروتئین، ستون SEC پلیمر، PLgel، Shodex SEC، Tosoh TSKgel، بهترین ستون SEC، فروش ستون SEC، آنالیز SEC، کد فنی ستون SEC
مقایسه ستون SEC Waters و Tosoh, راهنمای انتخاب ستون SEC برای mAb, تفاوت BioSep و XBridge در SEC, ستون SEC مناسب آنتی‌بادی, ستون SEC برای جداسازی IgG, بهترین ستون SEC برای UPLC, آنالیز SEC با ستون Cytiva Superdex, ستون SEC برای اندازه‌گیری وزن مولکولی پروتئین, آنالیز پلیمرها با ستون Phenogel, انتخاب ستون SEC با منافذ 300 آنگستروم, جدول مشخصات ستونهای SEC برندها
خرید ستون SEC Agilent, ستون SEC Waters, ستون SEC Thermo Fisher, ستون SEC Tosoh, ستون SEC Shimadzu, ستون SEC Supelco, ستون SEC Shodex, ستون SEC YMC, ستون SEC Hamilton, ستون SEC Phenomenex, ستون SEC BioSep, ستون SEC Cytiva, ستون SEC Superdex, ستون SEC GE, ستون SEC Restek, ستون SEC MAbPac, ستون SEC AdvanceBio, ستون SEC PLgel, ستون SEC XBridge, ستون SEC BEH200, ستون SEC برای پروتئین, ستون SEC برای پلیمر, ستون SEC برای آنتی‌بادی, بهترین ستون SEC برای mAb, ستون SEC برای HPLC, قیمت ستون SEC Waters, مشخصات ستون SEC Thermo, خرید آنلاین ستون SEC Phenomenex, خرید اینترنتی ستون SEC Cytiva
دکتر کرامتی –
بسیار ممنون بابت راهنمایی
واقعا حرفه ای